完蛋！审稿人竟对我的 qPCR 结果提出这么多要求 （附解决方案）
师弟
师兄，我现在很发愁。目前文章接收的拦路虎在 qPCR 实验结果这部分，我没想到要求会这么严格，我要延毕了......
审稿人具体是什么样的要求呢？
师兄
师弟
一位审稿人特别严谨，按照 MIQE 指南要求我提供必要的实验和数据处理细节（实验设计、样本、核酸提取、反转录、靶基因、qPCR 引物、探针、qPCR 验证和数据分析）。我的 qPCR 实验并不完美，虽然 CT 值在可接受范围内，但扩增曲线不尽人意。正常的 qPCR 扩增曲线一般呈 S 型，我的部分实验图曲线异常，出现了平台期下降，我怕是解决不了这个问题。
这个问题我帮你解决，你可以先申请延长回复审稿意见，我们一起尽快完善 qPCR 实验。
师兄
为帮助大家了解 qPCR 流程，完成优质的 qPCR 实验，2022 年 12 月 7 日（周三）14:00～15:00 ，Bio-Rad 资深应用专家余小菁将带来主题为【如何设置基于 qPCR 的基因表达分析实验 —— 从样本到结果】的在线课程直播。
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实时荧光定量 PCR（qPCR）技术几乎贯穿了现代分子生物学的历史，广泛应用于病原微生物、疾病诊断、动植物、遗传育种、细胞生物学等领域，对于推动生命科学的进步，具有举足轻重、承上启下的作用。早在 2009 年，行业资深科学家制定 qPCR 实验最低信息标准 MIQE，即在文章投稿时需要同时提交一份检查清单，由 9 部分组成，共 85 个参数，以确保 qPCR 实验的实用性、准确性、和可重复性。
图 1：来源 NCBI
如该流程图所示，其囊括了 qPCR 实验所有的实验步骤，但以下实验步骤科研人都全面掌握了吗？qPCR 实验如若掌握不到位，轻则拖沓实验进度，无法获取有效数据，可能会引起导师的不爽，重则导致文章达不到行业金标准，无法顺利见刊，有延期毕业之风险。
图 2. qPCR 实验步骤流程图
【「伯」采众长，解密基因】专题研讨会，带你系统的了解整个基因表达分析实验流程，以及关键节点，如 assay 的建立、验证与优化、qPCR 数据分析等，我们真诚为大家分享完善的、科学的、全流程符合 MIQE 指南的 Bio-Rad 解决方案。
在此我们先选取 3 个代表性的问题以及解决方案，做一个小小的预告，后续精彩内容和细节详见专题网络研讨会：
问题 1：如何完善基因表达分析流程，得到准确可靠的 qPCR 数据？
解决方案：良好的实验设计和 RNA 质量是实验成功的基础，之后选择合适的参考基因进行相对定量分析，结合合适的统计方法（t 检验、方差分析 ANOVA），多管齐下为实验保驾护航。
问题 2：qPCR 实验重复性差怎么办？
解决方案：除了要关注 qPCR 实验生物学重复性，做好样品处理与质量控制，也要注意 qPCR 实验常会存在批次效应，复孔重复性差，大多因为加样误差导致，建议移液器定期校准，同时可通过扩大反应体系或提前配制好预混液。
问题 3：想要完美的 qPCR 实验结果需要重视哪些方面？
解决方案：qPCR 实验在实验设计、样本、核酸提取、反转录、靶基因、qPCR 引物、探针、qPCR 验证和数据分析等九大模块中都会遇到阻碍，本课程针对各个步骤，非常详细地介绍了解决这些困难的要点，帮助大家获得完美的 qPCR 实验结果。
注：
1.相关产品仅限科研使用，不作为临床诊断；
2.Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories，Inc 在特定区域的商标。
内容策划：王丹琦
内容审核：钟可可
题图来源：丁香园论坛
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