来源：转化医学网

CRISPR/CAS9，强大的基因编辑工具，能够有效纠正疾病相关的突变基因。美国宾夕法尼亚大学医学院的研究人员首次利用此基因编辑工具开发了一种基因治疗方法，用于治疗老鼠的乙型血友病。乙型血友病也被称为凝血因子 IX 缺乏症，是一种凝血因子IX基因缺陷引起的X染色体连锁的出血性疾病。根据疾病控制预防中心所提供的数据，血友病的发病率大约为1/5000，美国现有2万血友病患者。

这项研究成果将于第58届美国血液学会会议上呈现。

多数单基因疾病，如血友病，是由分散在某基因上的不同碱基同时突变造成的，而不是某一主要突变造成，因此研究团队需要构建一种载体，这种载体能够应用于携带任何突变的患者。一直以来，CRISPR/CAS9基因编辑技术用于治疗多数疾病的可行性只是概念上的可行性。然而，这项研究却为CRISPR/CAS9的临床应用提供了证据。

为了验证这种新方法，研究团队以凝血因子IX敲除的小鼠为模型进行了相关实验。他们使用双载体方法，载体1由肝脏特异性启动子驱动SaCas9基因表达，因此基因编辑工具定位在肝脏中，肝脏是产生凝血因子IX的场所。载体2的运用使得这次研究方法不同于GTP以往的CRISPR基因编辑治疗方法，载体2包含一段特异性识别老鼠凝血因子IX 基因5 '端的RNA序列和部分人类凝血因子IX的cDNA序列，使得这种新方法的有效性和准确性大大提高。

研究团队使用腺病毒载体传递这些组件到小鼠的肝细胞。他们提出的这种策略是以CRISPR同源重组为基础，将人的cDNA插入到老鼠基因组上凝血因子IX定位的位置。GTP的博士后Wang提出：基因靶向插入使得嵌合凝血因子IX蛋白能够在老鼠原本的凝血因子IX启动子的控制下有序的表达。

研究人员向新生以及成年基因敲除小鼠体内注射这两种载体，注射量不断增加。在八周的注射治疗后，切除其中一部分基因敲除小鼠的部分肝脏，研究人员发现在没有任何干预措施的情况下，这些切除肝脏的小鼠都存活下来并且无并发症，同时，这些小鼠还以原来的水平表达凝血因子IX。

“这项研究毫无疑问的说明了CRISPR/CAS9基因编辑技术可以有效的治疗患乙型血友病的小鼠。”wang说。Wilson实验室的访问学者Yang Yang博士后、John White以及Peter Bell 都是此文章的共同作者。